东西分析气相色谱-质谱法测定尿中有机酸

我们的身体无时无刻不在进行着复杂的化学反应（新陈代谢）。碳水化合物、脂肪、蛋白质等营养物质的分解与合成过程中，会产生大量中间体和终产物，其中很多属于有机酸。这些有机酸分子量不大，溶解性好，最终会随着尿液排出体外。因此，尿液有机酸的种类和含量，就像一本实时记录的“化学日记”，忠实反映了体内多条关键代谢途径的运行状态。它们是能量生成（如三羧酸循环）、氨基酸代谢、脂肪酸氧化、肠道菌群活动甚至神经递质代谢的直接或间接“见证者”。

要从成百上千种复杂成分的尿液中，准确识别并定量这些微量的特定有机酸，绝非易事。东西分析GC-MS 3250型气质联用仪配备高性能四极杆质量分析器，能清晰分辨结构相似化合物的细微差异，并检测到极低浓度（常达 ng/mL 或 ppb 级）的有机酸，本文介绍了采用气相色谱-质谱法测定尿中有机酸的实验方法，建立了基于东西分析GC-MS 3250型气质联用仪的测定方法，可供相关人员参考。

GC-MS 3250型气质联用仪

实验部分

仪器条件

色谱条件：

Equity-5（30m×0.25mm×0.25μm)石英毛细管柱，柱流量:1mL/min，分流进样，分流比：40:1，进样量：1uL，进样口：260℃，柱温：80℃保持1min，然后以5℃/min升至270℃,保持2min。 

质谱条件：

EI源，电子能量:70eV，离子源:200℃，接口:270℃，扫描方式：全扫描定性，扫描范围：50u500u，溶剂峰时间：5min，电子倍增器高压：700 V。

样品前处理

取约20mL尿样于50mL塑料离心试管中，置于离心机中离心约5min，移取2ml澄清尿样于10mL的玻璃具塞试管中，加入50uL 4000mg/L的十七烷酸内标物， 加入1mL 5%盐酸羟胺水溶液，涡旋混匀，室温下进行肟化反应60min；肟化反应完成后加入一定量的盐酸调节PH值为1，加入约1g氯化钠涡旋使水层饱和，加入3mL乙酸乙酯涡旋提取，提取两次，静置分层后将提取液合并于同一玻璃具塞试管中（共准确移取出5mL提取液），然后于氮吹仪中50℃慢慢吹干，吹干后加入200uL衍生化试剂（BSTFA+TMCS 99:1），涡旋混合，然后放置于烘箱中于80℃衍生化反应30min，反应完成后将其转移至2mL小样品瓶中，然后取1uL进GC-MS分析。

实验结果

有机酸标样谱图

有机酸衍生物定性结果

目标化合物校准曲线方程和线性相关系数

实验总结

本实验成功建立了基于气相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 的尿中有机酸高灵敏度检测方法，依托东西分析GC-MS 3250型气质联用仪的高性能四极杆质量分析器，实现了对复杂生物样本中痕量代谢标志物的精准定性与定量分析。其出色的线性关系（R²>0.997）与多代谢通路覆盖性，使其在临床诊断、代谢组学研究及新生儿筛查等领域具备重要应用潜力，可供相关人员参考。