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Agilent ExD Cell 是 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 的附加装置，通过引入电子捕获解离
(ECD) 来增强平台表征多肽和蛋白质的能力。ECD 是另一种分子碎裂技术，与碰撞诱导解离 (CID) 互补。借助 ExD
Cell，系统能够对完整蛋白质进行自上而下的碎裂，通过侧链片段区分异构体残基，并产生能够提供重要信息的片段，同时保留易损修饰，如糖基化和磷酸化。
ExD Cell 的高 ECD 效率使其能够分析电荷较低 (≥ 2+) 的分析物，克服了电子解离技术长期以来的限制。结合 6545XT 的优势，如超高真空和高达 4000 m/z 的四极杆分离，使其成为自上而下以及自中而下表征大分子蛋白质的理想选择。
特性
超高效的 ECD 意味着可以花费更少的时间进行微调以大幅提高性能，而且更适用于难分析和低丰度的多肽和蛋白质。
使用 Agilent BioConfirm 12.1 进行自下而上的肽谱分析或使用 ExDViewer 进行自上而下的分析，可以快速、直观和可靠地解读信息丰富的 ECD 谱图。
将 ExD Cell 安装在碰撞池后，通过将调谐与上游光学元件分离，简化了操作，从而简化了方法设置。
ExD Cell 可现场安装，也支持后期安装，帮助您尽可能充分利用对 6545XT LC/Q-TOF 的现有投资。
新的化学调谐标准品由添加到调谐混标中的有机可溶性肽（蜂毒素）组成，为常规校准、仪器调谐和 ECD 方法初始化提供了单瓶装溶液。
结合 6545XT 的固有优势，如超高真空和高达 4000 m/z 的四极杆分离，使该系统非常适合大分子蛋白质的自上而下和自中而下表征。
性能指标
Filament Life | · >500 hours |
典型应用 | · 肽 · 蛋白质 |
支持的仪器 | · 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF |
支持的附加软件 | · ExDViewer 4.6 |
软件平台 | · 适用于 LC/TOF 和 LC/Q-TOF 的 MassHunter 采集软件 11.0 更新 2 |
工作原理
快速高效的电子捕获解离
Agilent ExD Cell 可实现出色的电子捕获解离 (ECD) 效率，提供关于蛋白质结构、序列和修饰的重要信息。准确控制气体压力和静电电压可促进连续的分析物离子流与捕获的低能电子云之间的相互作用。由此产生的高效 ECD 可产生丰富的碎片离子，即使对于仅带两个电荷的多肽也是如此。
利用互补的碎裂技术全面表征蛋白质
传统的碰撞诱导解离 (CID) 主要生成 b 型和 y 型离子。相比之下，电子捕获解离 (ECD) 生成 c 型和 z 型离子，同时可保留不稳定的翻译后修饰，并为大分子肽和蛋白质提供更丰富的碎片离子。将互补的碎裂技术（ECD 和 CID）与成熟的 Agilent 6545XT Q-TOF LC/MS 平台相结合，为 PTM 分析、多肽测序以及自上而下和自中而下分析创建全面的解决方案。
使用 ExDViewer 轻松完成自上而下的分析
Agilent ExDViewer 软件可助您解析信息丰富的自上而下 MS/MS 谱图，实现可靠的序列确认。ExDViewer 提供了简单直观的体验，降低了自上而下和自中而下蛋白质表征的进入门槛。
应用
表征糖基化和磷酸化等不稳定修饰
某些具有重要生物学意义的蛋白质修饰（如糖基化和磷酸化）容易被 CID 裂解，产生修饰结构或位点不明确的谱图。另一方面，ECD 倾向于保持不稳定修饰的完整性，产生保留修饰的氨基酸骨架碎片离子，可直接提供修饰质量和位点的信息。在抗体酶解物产生糖肽的这个示例中，ECD 产生了碎片离子，将多聚糖明确表征为 G0F。
通过侧链碎片离子区分氨基酸异构体
通过完整质谱分析和 CID 通常无法区分氨基酸异构体。ECD 可产生可直接区分亮氨酸/异亮氨酸和天冬氨酸/异天冬氨酸的氨基酸侧链片段。这对表征抗体的互补决定区尤其重要，因为这些区域中的替换或修饰可显著改变抗原结合。在该示例图谱中，ECD 碎片离子可提供合成肽特定位置上异天冬氨酸和异亮氨酸残基的证据。
自上而下的蛋白质表征
在“由上而下”的蛋白质表征中，完整蛋白质前体会被片段化。ECD 大大提高了获得的信息深度，可直接对中等大小的蛋白质进行序列确认，而不需要酶解，或在蛋白质结构水平上进行组合修饰的分析。完整碳酸酐酶 (29 kDa) 的 20+ 个前体的 ECD 表现出 84% 的氨基酸序列覆盖率，其碎裂模式富含序列信息离子。
